小鼠ELISA試劑盒基于抗原抗體特異性結(jié)合原理，采用雙抗體夾心法等檢測模式。先將特異性抗體包被在微孔板形成固相抗體，加入待測樣本后，目標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的檢測抗體，形成“固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入底物(如TMB)，酶催化底物顯色，顏色深淺與抗原量正相關(guān)。用酶標(biāo)儀測定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算抗原濃度。
小鼠ELISA試劑盒的測定步驟：
1.樣本準(zhǔn)備：推薦使用血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、細(xì)胞上清或組織勻漿等樣本類型。血清/血漿樣本采集后應(yīng)立即離心，取上清分裝保存于-80℃，避免反復(fù)凍融；組織樣本需在冰浴中勻漿，使用預(yù)冷的生理鹽水或RIPA緩沖液，勻漿后同樣離心取上清。所有樣本在使用前需恢復(fù)至室溫并充分混勻。
2.試劑準(zhǔn)備：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水準(zhǔn)確稀釋至工作濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。標(biāo)準(zhǔn)品按說明書梯度稀釋，建議使用多通道移液器以提高一致性。酶結(jié)合物與顯色液需避光保存，使用前平衡至室溫并輕柔混勻。
3.加樣操作：在酶標(biāo)板上設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔和空白孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔按照特定順序進(jìn)行稀釋和加樣，確保每孔加樣量準(zhǔn)確。待測樣品孔先加樣品稀釋液，再加待測樣品，輕輕晃動(dòng)混勻。加樣時(shí)應(yīng)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁。
4.溫育與洗滌：用封板膜封板后置37℃溫育一定時(shí)間。溫育結(jié)束后，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置一段時(shí)間后棄去，重復(fù)多次，拍干。
5.加酶與再次溫育洗滌：每孔加入酶標(biāo)試劑(空白孔除外)，重復(fù)溫育和洗滌步驟。
6.顯色與終止：每孔先加入顯色劑A，再加入顯色劑B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色。顯色適當(dāng)時(shí)，每孔加終止液終止反應(yīng)。
7.測定：以空白孔調(diào)零，在特定波長下測量各孔的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。
您的位置：
更新時(shí)間：2025-12-26 
瀏覽次數(shù)：18
